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公司新闻

慢病毒、腺病毒、AAV体内注射—不同系统中的注射方法及用量

发布时间:2018-04-16 15:26 |  点击次数:

对于科研工作者来说,由于动物实验更能模拟人类的生理和病理条件,所以比体外实验更有说服力。在某个通路或某种疾病的研究中,通常会人为地将外源基因用病毒载体注入动物组织,检测其对其他基因和通路、组织器官、动物行为等的影响。但这类动物实验条件的摸索和优化,是一个难点。如何选择注射的部位、选择何种病毒、注射多少体积、以及注射后的检测时间等实验条件都需要摸索。
 
首先,介绍几种常用病毒载体及它们之间的比较





在实际应用中,可根据实验目的来挑选合适的工具病毒,如:
1. 工具载体的表达时间与实验观察时间是否相符;
2. 工具载体可以容纳的片段大小与目的基因大小是否契合;
3. 工具载体对在体组织的转导是否足够高效。



选择好了合适的病毒类型,那么如何注射、注射多少量及注射后多长时间检测等参数还需要摸索。吉凯基因查询多篇文献,并将使用的病毒类型、注射量、注射方法及检测时间等参数汇总成表,供您参考。
 
一、不同系统注射病毒所需体积及病毒量的文献参考值
 
1. 病毒注射文献综述——神经系统




2.
病毒注射文献综述——心血管系统




 
3.  病毒注射文献综述-肝脏




神经领域更多病毒注射文献及更多注射部位(如眼、肾脏、肺等)的注射参数等信息和文献请点击[这里]吉凯基因索取资料。
 
二、病毒在不同系统中的注射方法综述
工具病毒的注射方法主要可以分为系统性注射和原位注射两种方法。其中系统性注射常用的注射方法为尾静脉注射和腹腔注射。
 
1. 系统性注射
1.1 尾静脉注射




1.2 腹腔注射




更多原位注射操作方法(如脑立体定位注射、心脏原位注射、角膜下原位注射、肝原位注射、肺原位注射等)请
点击[这里]吉凯基因索取


三、基因操作工具在体应用-FAQ

Q1、 慢病毒、腺病毒、AAV 的检测周期分别是多长?



Q2、  为何有时病毒在体实验的感染效率不理想?
       生物体内的环境非常复杂,在病毒感染细胞后,可能病毒可以很好的感染细胞,但受到各种各样体内调控因素的影响,导致病毒携带的外源基因不表达,或者表达的水平不够高。而在细胞系或者提取的原代细胞上,由于去除了体内复杂的影响因素,病毒的感染和表达相对会比较好。
      
Q3、如何提高病毒的在体实验感染效率?
       查询相关的文献,参考文献中病毒用量,注射方法,注射位点等详细信息,再摸索一下实验条件,改变一下病毒的注射方法和用量等。很多情况下,感染效率不好并不是病毒本身的原因,而是由于实验操作步骤、注射位点、或者注射方法的问题导致的。经过一段时间的实验条件摸索,可以得到相对更好的结果。
 
Q4、 冰冻切片发现组织碎片很多、或者切片发现组织有洞?
      首先,可能是组织在处理的时候,在多聚甲醛中浸泡的时间过长,或者是组织在处理过程中没有全程在PBS中浸泡,还可能是组织在-80 °C冰箱中贮存的时间太久,这些原因都会使组织变脆,变干,缩小,产生空洞。其次,可能组织没有在切片前复温 30 min,组织冻的太硬,会使切片产生碎片。
 
Q5发现切片后的背景很高、或者出现许多异常明亮的亮点?
背景很高的原因主要是组织太干,一方面可能是由于在多聚甲醛中浸泡的时间太久,另一方面可能是由于切片后组织晾的太干燥,一些背景可以通过适当的图片的后期处理解决。明亮的亮点可能是PBS没有过滤就用来洗片子,里面有杂质,或者是镜头上面的杂质,有些亮点可能也与组织本身的结构有关。