实验秘笈--最亮的转染怎么做？

A：分析：主要是铺板和反应液配制的原因

⇒ 细胞状态是整个实验的关键，如果细胞状态不好，则转染后细胞状态当然就好不了

⇒ 铺板：过多或不均匀，细胞长的太满就会状态较差

⇒ 脂质体本身有毒性，如果脂质体加入量太多，会导致细胞状态较差，或者细胞死亡，建议在做正式实验前，先做一下预实验，摸索一下质粒和脂质体的配比。

A：分析：主要是细胞原因和“搬运”过程中的问题

❶. 细胞状态仍然是重中之重，如果有一段时间转染效果很不理想，必须要换一批次细胞；

❷. 加入目的质粒后轻轻混匀，太用力会破坏混合液的结构，

❸. 质粒与转染试剂的比值： 过高一部分质粒不能进入细胞，过低“搬运工”太多，有毒性且浪费；

❹. 吸、打液体时注意枪头内液面高度，是否完全打出；

❺. 反应液配好后等待20min，质粒才会被完全包裹；

❻. 反应液滴加加入细胞，使“脂质体+质粒”均匀分布；

❼. 质粒反复冻融影响浓度，尽量减少冻融次数；脂质体 -20℃保存，用完应马上放回；

❽. 必要时需要检测一下质粒的浓度是否准确；

转染需48h，可以提前知道转染的效果吗？

根据经验转染24h时的荧光效果至少达到下图水平那么基本上不用担心了~