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同样是慢病毒感染细胞,为什么你的效率那么差!

发布时间:2019-04-11 14:34 |  点击次数:

慢病毒不但可感染分裂或非分裂细胞,还可将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久表达,又很少引发机体免疫反应。被誉为「细胞实验首.选、体内实验必备」工具病毒。

并且作为基因载体在治疗各类遗传性和后天性的人类疾病中倍受欢迎:从基础研究发展到临床阶段,高浓度、高感染效率的慢病毒都是感染细胞表达(或沉默)目的基因的理想分子工具。

那么慢病毒在感染细胞中有什么优良表现呢?

慢病毒感染细胞的步骤一般是这个样子的,以「24 孔培养板、贴壁细胞」为例:

Day0: 接种细胞
每孔按 5×104 个待感染细胞铺板,用含有 10% FBS 的 DMEM 培养基培养;

Day1: 细胞感染
感染前,根据说明书用完全培养基配置感染液,备用吸掉旧培养基,更换为感染液; 并参考细胞 MOI 值,计算病毒使用量,加入病毒进行感染,混匀;

Day2 
病毒感染 8~16 h 后,换回常规培养基,继续培养;

Day3~4: 确认感染效果
感染 72 h 后,显微镜下观察感染效果,如 EGFP、Cherry 的表达情况;

如果都这么简单的话,那你真的是 too young too simple! 

那么在慢病毒感染细胞过程中,到底会遇到哪些问题呢?此贴统统帮您搞定~~

难感染问题该如何解决?

对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,可以通过添加病毒感染增强液来显著提高转染效率。

吉凯基因自主研发了 HitransG A 和 HitransG P 2 款感染增强液,可显著提供难感染细胞的感染效率。详细看一下这 2 款增强液的原理和适用范围。

 

感染增强液 原理 优势 适用范围
HitransG A 主要成分是一种新型的高分子非离子表面活性剂,同事也是一种细胞保护剂和促进吸收剂;可以通过提高细胞表面活性,增加病毒与细胞的接触面积 促进病毒高效感染细胞,且对细胞毒性较低 敏感细胞
HitransG P 是一种阳离子聚合物,通过抑制细胞膜与病毒之间的电荷排斥,增加慢病毒对细胞的感染效率 极大提高细胞感染效率,且细胞毒性显著低于 Polybrene 替代 Polybrene

以下是使用吉凯基因包装的慢病毒配合效果图 HitransG 在难感染细胞中的效果图,从此再也不担心细胞难感染的问题。

K562 细胞   MOI=30
NC         HiTransG P

 

 
THP-1 细胞   MOI=30
NC         HiTransG A


 
MR1 细胞   MOI=30
NC         HiTransG P


除了难感染外,感染效率低和加入慢病毒后,细胞死亡也是科研的又一拦路虎。
 
  • 针对加入慢病毒后,细胞死亡很厉害,该如何处理?
这种情况是由于慢病毒对该细胞有一定的毒性作用,需要调整并降低感染的 MOI 值,并且在感染后 4 小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察,若发现细胞状态变差时,则需要立刻对细胞进行换液操作,使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。
 
  • 如何提高慢病毒对细胞的感染效率?
慢病毒对细胞的感染效率受多个因素影响,如细胞自身生长的状态,细胞数量,细胞被慢病毒感染的难易程度等。因此保证细胞正常增殖,轮廓清晰,合适的细胞密度,选择最优的感染条件可以更好的保证感染效率。对于悬浮细胞,可采用离心感染方法,减少病毒感染时的体积,从而提高感染效率。如将细胞培养板密封后,用平角转子离心机 1000 g 离心 1 h,再放回培养箱中正常培养。

如果这些技能您都掌握了,那么恭喜您离 Nature、Cell、Science 又近了一步~~我们一起来看看 2018 年那些用了吉凯基因慢病毒的科研大咖都发表了什么样的文章


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