慢病毒实验经典问题，你知道几个？

马上要做慢病毒实验了，完全无从下手啊！

怎么准备实验，哪个公司的慢病毒产品靠谱啊？

就算找到靠谱的供应商，我也不会找感染条件啊？

就算找到感染条件细胞也不一定活啊？

就算细胞活了咱也不会看荧光啊？

就算咱会看荧光咱也不会设计引物验证啊？

就算咱会验证咱也不知道啥时候可以做下游啊？

…………

慢病毒相关实验可能遇到的问题千百个，但是有些问题是大部分人都会遇到的，我们会把慢病毒实验经常遇到的问题以问答的形式教大家怎么做，本期我们先讲讲细胞感染病毒实验经常遇到的问题以及解决办法。

 

1、寻找合适的慢病毒感染条件：

使用不同助感试剂和不同的细胞数与病毒颗粒数比例进行感染预试验，感染后选择感染效率在80%左右，感染后细胞状态正常且病毒使用量最小的感染条件作为最佳感染条件。

实验要点：
 

1. 可以使用不同的助感试剂进行预试验，传统的Polybrene试剂可以满足一部分细胞转染的需要，但是Polybrene具有一定的细胞毒性，对于敏感细胞并不适合。建议使用细胞毒性小的病毒感染试剂，如HitransG病毒感染试剂；

2. 使用不同的细胞数与病毒颗粒数的比例进行预试验；

3. 选择感染效率为80%左右，感染后细胞状态正常且病毒使用量最小的感染条件作为最佳感染条件。

 2、选择合适的细胞

在做病毒感染时除了使用合适的感染条件，更重要的是要使用处于对数生长期且细胞状态正常的细胞，这样才能保证细胞在受打病毒感染后仍能顽强生存。

另外，细胞最好有STR分型鉴定以及经过支原体污染检测。对新买来的细胞，最好使用支原体检测试剂盒进行检测，如果在培养过程中以及发现支原体污染，可以使用支原体去除试剂盒消除细胞中的支原体。
 

3、选择合适的荧光波长

不同的荧光基团要使用不同的发射波长，三种常见荧光的信息如下：

GFP 激发波长488  发射波长507

RFP激发波长563  发射波长582

mCherry激发波长587  发射波长610

表达病毒感染后qPCR检测无过表达效果原因
 

第一：很有可能是细胞目的基因内源表达水平太高，影响了外源的表达，建议选择低表达细胞系；

第二：引物设计问题，过表达构建的都是CDS区，所以引物必须设计在CDS区才能检测出外源的过表达

细胞感染效率不是越高越好

细胞在感染完后感染效率达到80%即可进入下游实验，不一定非到100%的感染效率才可进入下游哦。

慢病毒相关实验还会遇到哪些问题，欢迎大家关注微信公众号【吉凯基因】，说出你在做实验的过程中遇到的、希望我们帮您解答的问题。