项目文章 | 单细胞测序+空间转录组 挖掘JQF对非酒精性脂肪肝的治疗潜能

非酒精性脂肪肝（NAFLD）是全球范围内最为普遍的慢性肝病，影响着大约25%-30%的全球人口。这一疾病不仅会引发肝损伤，还可能发展为肝硬化、肝癌，甚至需要进行肝移植，严重威胁着人们的生命健康。随着人们生活水平的提高，NAFLD的发病率逐年上升，然而目前针对NAFLD尚无te效药物获批。

在我国传统中医领域，有一剂名为JQF的良方，源自古代中医经典《伤寒论》，由大黄、黄连、知母、赤芍等七味中药精心调配而成，经过现代改良，在治疗肥胖、2型糖尿病（T2D）和非酒精性脂肪性肝病方面效果显著，尤其擅长改善患者的“热证”。且 JQF 在治疗过程中几乎没有副作用。2025年1月，中国中医科学院广安门医院仝小林团队在Frontiers in Immunology（IF 8.786）发表了题为Targeting immune cellular populations and transcription factors: unraveling the therapeutic potential of JQF for NAFLD的文章，通过单细胞RNA测序（scRNA-Seq）和空间转录组学（ST）全面分析NAFLD的细胞和分子特征、空间位置信息以及JQF干预NAFLD的治疗机制，并推测JQF 或许可成为治疗 NAFLD 的新希望。

文章以雄性 C57BL/6J 小鼠为研究对象，用高脂饮食诱导小鼠患上 NAFLD，然后将小鼠分为对照组（NCD）、模型组(HFD)、二甲双胍治疗组(MET)和 JQF治疗组。在为期 8 周的治疗过程中，密切监测小鼠的体重、血糖等各项指标变化，主要有以下研究结果：

与 NCD 组相比，HFD诱导的NAFLD小鼠体重和空腹血糖（FBG）显著升高，而JQF干预8周后，体重增幅降低15.2%，FBG下降21.5%。HFD组小鼠肝脏重量、肝指数、肝甘油三酯（TG）显著增加，肝脏组织发生明显病理变化，脂质谱改变，血清ALT和炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）升高，Masson染色显示肝脏纤维化加重；JQF干预后，肝脂肪变性、炎症、纤维化显著改善，甘油三酯-葡萄糖指数（TyG）表明JQF缓解了肝脏胰岛素抵抗（IR）。

通过构建NCD和HFD诱导的NAFLD小鼠肝脏单细胞图谱，获得了 30,474 个细胞，鉴定出包括上皮细胞、内皮细胞、肝星状细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞等11种主要细胞类型。对 NCD 和 NAFLD 小鼠的肝组织进行空间转录组分析，结合单细胞测序数据，发现NAFLD小鼠肝脏内皮细胞被各种炎症和免疫细胞包围，且该区域的炎症和纤维化最为严重，尤其是在 T 细胞浸润的区域。巨噬细胞标记物 F4/80（Adgre1）和纤维化标记物（α-SMA、Col1a1 和 Col1a2）在该区域高度表达。免疫组化染色证实了非酒精性脂肪肝小鼠肝脏中存在炎症和纤维化，JQF治疗显著改善了这一情况。

对NCD组、HFD组和JQF组进行了独立分析，HFD 组的巨噬细胞和单核细胞比例明显高于 NCD 组，JQF 组的巨噬细胞和单核细胞比例明显低于 NCD 组。对B细胞、单核细胞等进行差异表达分析，HFD组DCs差异表达基因最多，JQF处理后B细胞差异表达基因最多。单核细胞通过释放细胞因子和趋化因子，在非酒精性脂肪肝的炎症反应中起着调节作用。此外，单核细胞可被激活并被招募到肝组织，在那里进一步分化为巨噬细胞，并促进肝脏炎症和纤维化。这些发现表明，JQF 可调节非酒精性脂肪肝的炎症和免疫失调。

鉴定出三种巨噬细胞亚群：单核细胞衍生巨噬细胞（MoMFs）、Kupffer 细胞（KCs）和NASH 相关巨噬细胞（NAM）。HFD 组中，MoMFs和NAM的比例明显高于 NCD 组，而KCs的比例则明显低于 NCD 组，在 JQF 干预后，MoMFs 和 KCs 的比例发生了显著变化，并有向 NCD 组发展的趋势，NAM在 JQF 干预后也有所下降。

进一步富集分析表明，KCs 富集于通过内吞作用吞噬脂质、调节胆固醇稳态的相关过程，以及与炎症和纤维化相关的通路，MoMFs 参与吞噬作用、促炎信号转导以及纤维化相关过程，NAMs则参与组织修复和重塑，以及脂质代谢、胶原合成等。JQF 治疗可显著改变巨噬细胞亚群的比例，表明 JQF 可能主要通过调节 KCs 和 MoMFs 发挥治疗作用。

对T细胞进行了亚群分析，发现了6个T细胞亚群，包括Th1、Th2、Tc、NKT、Treg和Th17。HFD组中，Th2和NKT细胞比例低于NCD和JQF组，Tc和Th1细胞比例高于NCD组，JQF干预后各亚群比例改变，Th2和Tc变化显著。Th1 细胞可参与自然杀伤细胞介导的免疫调节，Tc细胞通过诱导受损细胞凋亡来参与炎症反应和细胞毒性，Th2调节 T 细胞的活化并负向调节免疫系统。Th2和Tc可能是JQF缓解非酒精性脂肪肝的一个关键细胞群。

对HFD组和JQF组的18 个细胞群/亚群进行细胞通讯分析, 发现JQF 治疗后，整体细胞通讯增强: ICAM信号通路中，JQF处理后巨噬细胞通讯减少，巨噬细胞的自分泌和旁分泌信号减弱， Th2 细胞的自分泌和旁分泌信号增强，进而减轻炎症，缓解了纤维化；TGF-β信号通路中，JQF处理后Th2细胞通讯增加，抑制炎症和纤维化。

为了进一步探索调控巨噬细胞和T细胞平衡和活化的基因调控网络，作者通过SCENIC分析，在巨噬细胞中确定了 528 个转录因子，其中Stat2可能是JQF减轻NAFLD炎症的关键转录因子，在调节先天性免疫反应和干扰素的细胞信号传导中发挥着关键作用；Mta3参与调节免疫效应过程，Usf1和Pparg分别在MoMFs和KCs中调控肝脏脂质代谢。

在T细胞中鉴定出564个转录因子，其中Eomes在Tc细胞中调节白细胞分化，对白细胞介素-1 等细胞因子的产生具有正向调节作用；Etv5在Th2细胞中参与调控蛋白质降解和糖蛋白生物合成等过程。Eomes和Etv5可能是JQF发挥治疗作用的重要转录因子。