一文秒懂「工具病毒」在体实验的应用

慢病毒、腺病毒、AAV 体内注射—不同系统中的注射方法及用量

对于科研工作者来说，由于动物实验更能模拟人类的生理和病理条件，所以比体外实验更有说服力。

在某个通路或某种疾病的研究中，通常会人为地将外源基因用病毒载体注入动物组织，检测其对其他基因和通路、组织器官、动物行为等的影响。但这类动物实验条件的摸索和优化，是一个难点。

选择何种病毒、如何选择注射的部位、注射多少体积、以及注射后的检测时间等实验条件都需要摸索。

1. 病毒产品的选择？
 

病毒	慢病毒	腺病毒	腺相关病毒（AAV）
外源基因表达时间	2～4 天开始表达， 长时间稳定表达	1～2 天开始表达， 持续 7～14 天	7～14 天开始表达， 细胞分裂不旺盛部位可长时间表达

此时您可以根据您的研究目的，选择适合的产品。

AAV 注射动物后，一般会在 1～2 周左右开始表达，体内实验一般建议感染后 3～4 周看第一批结果。

2. 如何提高病毒的在体实验感染效率？

查询相关的文献，参考文献中病毒用量，注射方法，注射位点等详细信息，再摸索一下实验条件，改变一下病毒的注射方法和用量等。很多情况下，感染效率不好并不是病毒本身的原因，而是由于实验操作步骤、注射位点、或者注射方法的问题导致的。经过一段时间的实验条件摸索，可以得到相对更好的结果。

3. 如何确定细胞接种量？

一般细胞浓度可在 1×10⁶ 到 5×10⁷ 之间，浓度再大就可能会打不进去了。具体浓度需要参考相关文献并做细胞浓度梯度预实验，以确定接种量的范围。

4. 如何选择接种部位？接种深浅是否有影响？ 

按照实验要求选择接种部位，基本是腋下和背部。但接种部位一般不前腋下，这里血管丰富，易成活；接种于皮下，太浅则因血管少而不易成瘤，太深会在肿瘤长大后与周围的肌肉、结缔组织等相粘连，不能很好地分清肿瘤与侵犯的组织，特别是不易观察肿瘤的生长情况。 

腋窝中部外侧皮下为好。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。

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腺相关病毒（AAV）——体内实验必备工具

腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）是一类细小病毒，基因组 为单链 DNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。因其扩散性强、滴度高，在载体容量、观察时间可以满足的情况下，动物在体实验优先推荐使用 AAV。

如果想实现在体实验基因调控的特异性，请选择组织特异性启动子 AAV 哦！

目前吉凯基因可提供 20 余种特异性启动子，覆盖神经、肌肉、骨骼、心血管、眼科、肝脏、肾脏、脂肪、胰腺等多个研究领域，快速实现动物水平组织特异性调控。了解更多信息，请点击【这里】