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有了外泌体,miRNA的春天又来啦!

人阅读 发布时间:2019-08-19 14:28

有了外泌体,miRNA的春天又来啦!




常常听到很多老师无可何地说:现在miRNA已经过时了,别说发高分文章了,连一般的paper都不好发了,我还是不要研究miRNA了吧……

各位老师不要灰心,今天我们就给miRNA带来了一剂良药,让miRNA研究再次迎来它的春天! 

相信很多老师都已经注意到了,现在外泌体研究如火如荼,近几个月国内新出的关于外泌体的报道,每个月都在100篇左右,研究涉及各个领域,其中不乏很多高分paper。

更有趣的是,很多老师觉得再也没有研究意义的miRNA,在外泌体研究领域简直就是遍地开花呀!

下面我们一起来看看在神经退行性疾病领域,miRNA遇到外泌体会怎样?

基础篇

问题:痴呆是老年人最常见的神经退行性疾病,目前没有合适的相关生物标志物,如何寻找用于诊断痴呆和评估疾病的进展的生物标志物?

方法:Q-PCR验证备选的3个miRNA:miR-137,miR-155和miR-223,32名痴呆症的患者,16名没有痴呆的志愿者作为对照;血清外泌体,Q-PCR初筛3个备选的miRNA

结果:




 

首先对临床血清样本的外体进行抽提鉴定,确定抽提到的是外泌体,然后在血清样本中直接检测了三个备选miRNA:miR-137,miR-155和miR-223的表达,发现miR-223在痴呆病人的血清中显著下调。


 

进一步在血清外泌体样本中验证miR-223,发现和血清中的表达趋势一致。痴呆患者血清外泌体miR-223水平与CDR评分,MMSE评分,mI / Cr和NAA / Cr有很好的相关性

 

结论:血清外泌体miR-223是一种潜在的生物标志物,能够用于诊断痴呆和评估疾病的进展。

 

血清外泌体样本+Q-PCR筛选(3个miRNA)+Q-PCR验证(1个miRNA),So Easy

进阶篇


 

问题:额颞叶痴呆(FTD)患者的脑脊液(csF)中的外泌miRNas是否可以作为诊断生物标志物目前未知,而且哪些miRNA可以作为FTD的诊断标志物也未知

方法:两大类样本:一、遗传性额颞痴呆(GeNFI)队列:23个无症状的突变携带者;15个有症状的突变携带者;11个健康的非突变携带者。二、散发性额颞痴呆队列:17例散发性FTD患者;13例散发性阿尔茨海默病(AD);10名年龄相近的健康对照;脑脊液外泌体,Q-PCR arrays初步筛选以上样本脑脊液外泌体中752个miRNA的表达。

结果:


通过Q-PCR array初步筛选752个miRNA以后,发现了8个潜在的miRNA,接下来在不同突变类型携带者有症状和无症状的样本中进一步Q-PCR验证这8个miRNA,最后发现miR-204-5p 和miR-632在有症状的突变携带者中明显下调。

 

通过ROC曲线分析,脑脊液外泌体miR-204-5p和miR-632的表达在特异性和敏感性上都能够用于区分有症状和无症状的突变携带者。



 

通过ROC曲线分析,脑脊液外泌体miR-204-5p和miR-632的表达在特异性和敏感性上都能够用于区分有症状和无症状的突变携带者。



 

在散发性的FTD、散发性的AD和健康人的脑脊液外泌体中进一步通过Q-PCR验证miR-204-5p 和miR-632的表达,结果表明相对于散发性的AD和健康人,散发性的FTD中miR-623的表达显著降低,而miR-204-5p在三组中没有差别;ROC曲线分析,验证了miR-623区分三者的特异性和敏感性。

对miR-204-5p和miR-623进行靶基因的分析,发现miR-204-5p有375个靶基因,miR-623有38个靶基因,这些mRNA富集到了人额颞叶mRNA,并且主要涉及到Wnt信号通路。

 

脑脊液外泌体样本+ Q-PCR arrays +Q-PCR验证

高级篇

 

问题:阿尔茨海默病(AD)的早期诊断还没有统一的标准,本研究的目的在于寻找健康和AD患者的血清外泌体生物标志物。

方法:三组样本:一、健康(HC)23个;二、轻度认知障碍(MCI)3个;三、阿尔兹海默症(AD)23个。血清外泌体,NGS深度测序

结果:

NGS深度测序结果发现17种miRNA显著失调。

 

通过对失调miRNA的聚类分析,发现失调的miRNA主要集中在两个簇;分析了不同簇的miRNA的表达与APOE ε4等位基因的状态以及临床分类的相关性,并且按照对临床分类的贡献的重要性对miRNA进行排序。


 

再在另外60个血清外泌体样本中Q-PCR验证16个miRNA的表达。

 

 

血清外体样本+NGS(深度测序)+Q-PCR验证

 

 

看到上面的文章分析,老师们有没有很激动?是不是感觉啥也没做,收集一下临床样本,抽提一下外泌体,通过组学手段找找潜在的miRNA,然后Q-PCR验证这些潜在的miRNA,最后确定一个或多个外泌体miRNA作为神经退行性疾病的潜在诊疗biomarker,就可以发文章了!

 

小编都不敢相信这是真的,曾经我们以为没有什么可做了,不好发文章的miRNA,和外泌体结合以后这么厉害!老师可以行动起来了,收集临床样本了,外泌体—miRNA—biomarker走一波~~


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