作者：肖叶宁

肝细胞癌是一种较常见的恶性肿瘤类型，其发病率及死亡率较高，而且早期诊断困难，治疗后生存率仍不理想。CCNB2是细胞周期蛋白家族的重要成员之一，是细胞周期进程的正调控分子，能促进多种恶性肿瘤肿瘤发生发展，但在肝癌中生物学功能尚不清楚。本课题组前期研究发现CCNB2和肝癌的发生发展紧密相关，具备成为新型诊断生物标志物和临床治疗靶点的前景，其具体机制仍需进一步解析。

2022年3月29日，中南大学湘雅医学院附属海口医院黄晓曦教授团队在《Aging-US》上发表题为“Cyclin B2 overexpression promotes tumour growth by regulating jagged 1 in hepatocellular carcinoma”的研究论文，该研究揭示了CCNB2或许经由对JAG1的靶向调节在肝癌发生发展中发挥作用，为进一步研究肝癌发病机理指出了新的思路。CCNB2可能与肝细胞癌的发生发展进程有关，有作为新的治疗靶点的潜力。本研究中用于敲低CCNB2的慢病毒产品及用于发现CCNB2下游基因的蛋白质组学、IPA分析均由吉凯基因提供产品或技术服务。 研究思路概述
通过转染慢病毒构建CCNB2敲低的肝癌细胞模型，使用裸鼠荷瘤模型检验CCNB2对肝癌的影响。通过TMT蛋白质组学检测CCNB2下游靶基因，并通过差异蛋白分析、PRM靶向蛋白组学验证和IPA分析最终筛选出JAG1。基于此，进一步解析CCNB2通过调控JAG1促进肝癌进展的机制。

研究结果
1. 构建CCNB2低表达的肝癌细胞系
通过转染慢病毒构建CCNB2低表达的肝癌细胞模型，采用实时荧光定量 PCR评估CCNB2的敲低效率。CCNB2-RNAi慢病毒（由吉凯基因提供）感染后慢病毒感染后的KD组Huh-7细胞中CCNB2基因表达水平明显下调。
2. CCNB2促进裸鼠肿瘤生长
向随机分组的20只裸鼠分别皮下注射敲低CCNB2的肝癌细胞系Huh-7和未敲低的肝癌细胞系Huh-7，并观察裸鼠成瘤情况。裸鼠成瘤实验结果提示，敲低CCNB2降低裸鼠成瘤率、减小瘤体体积和重量、敲低CCNB2抑制瘤体增殖。总体结果提示，CCNB2可能具有促进肝癌增殖，影响肝癌产生和进展的作用。
3. 蛋白质组学寻找受CCNB2调控的下游基因
进一步，使用敲低CCNB2（KD组，n=3）和未敲低CCNB2（NC组，n=3）的肝癌细胞系Huh-7进行TMT蛋白质组学检测（由吉凯基因提供）以筛选受CCNB2调控的下游基因。蛋白质组学共检测到7271个蛋白，其中130个蛋白存在表达差异（fc>1.2，p＜0.05），包含78个上调蛋白和52个下调蛋白。我们从筛选出的差异蛋白质中挑选30个蛋白进行PRM靶向蛋白质组学验证及IPA分析（均由吉凯基因提供）。结果提示，一个蛋白JAG1在敲低组中下调，且IPA分析显示JAG1与肝细胞癌增殖和凋亡相关。因此，JAG1作为CCNB2的潜在下游靶点用于后续研究。
4.下调CCNB2可抑制JAG1的表达
我们检测了裸鼠瘤体中CCNB2与JAG1的表达相关性，结果表明敲低CCNB2可以使JAG1表达下调，CCNB2与JAG1的表达存在明显的功能相关性。
5. CCNB2通过调控JAG1促进肿瘤细胞增殖和迁移
我们继续在CCNB2敲低或对照的Huh-7细胞中过表达JAG1，并检测肝癌细胞增殖能力的改变。结果显示，敲低CCNB2 降低肝癌细胞系的增殖、迁移和侵袭能力，而过表达JAG1部分回复了CCNB2敲低引起的增殖、迁移和侵袭能力减弱的作用。这一结果印证了CCNB2与JAG1存在明显的功能相关性，JAG1可能作为CCNB2的下游靶点发挥促进肝细胞癌发生发展的作用。
6. JAG1在肝细胞癌组织中表达上调
本研究收集了82例肝癌石蜡包埋样本和相对应的20例癌旁石蜡包埋样本。免疫组化检测证实了JAG1在肝细胞癌组织中高表达，并且JAG1表达与肿瘤大小、肿瘤数目、癌栓形成显著有关。 研究总结
我们的研究验证了敲低CCNB2在肝癌裸鼠成瘤中的作用，发现敲低CCNB2基因可抑制裸鼠成瘤。CCNB2可能具有促进肝癌增殖作用。通过蛋白质组学、PRM靶向蛋白组学验证和IPA分析筛选出CCNB2的下游靶标JAG1。细胞功能回复实验验证了CCNB2可能通过调控JAG1在HCC发生发展中发挥功能。总体，本研究发现了CCNB2的促癌作用，且揭示了一种新的CCNB2下游作用机制。CCNB2在未来可能有机会作为肝癌的候选生物标志物。
该研究揭示了CCNB2或许经由对JAG1的靶向调节在肝癌发生发展中发挥作用，为进一步研究肝癌发病机理指出了新的思路。CCNB2可能与肝细胞癌的发生发展进程有关，有作为新的治疗靶点的潜力。

吉凯基因凭借多年在靶标筛选及验证服务领域的技术积累，建立的标准化 、工程化 、系统化的GRP平台，为中国研究型医生提供科研服务，加快科研成果转化。其中，多组学平台包含蛋白质组学平台和高通量测序平台：

·蛋白质组学平台拥有多台timsTOF Pro、Exploris 480高精度质谱仪，专业的Spectronaut Plusar、Mascot等分析软件，提供专业的4D、DIA、TMT、PRM、磷酸化修饰组、olink蛋白质组等检测服务，强大的机器学习算法、IPA分析、蛋白基因组分析服务，系统的生物标志物、分子分型、药物靶点、基因功能研究等解决方案，真正让广大研究型医生的科研工作更省心、更省力、更高效；

·高通量测序平台分为常规测序服务和单细胞测序服务：单细胞测序拥有10x和BD两个平台，提供单细胞RNA-seq、单细胞核测序、单细胞混样RNA-seq、单细胞TCR/BCR、单细胞（RNA+ATAC）、空间转录组测序等服务；常规测序服务提供meRIP-seq（m6A/m1A/m7G/m5C 等RNA甲基化修饰测序）、acRIP-seq（ac4C RNA乙酰化修饰测序）、ATAC-seq、Ribo-seq（翻译组测序） 、mRNA/miRNA/LncRNA/circRNA-seq、全转录组测序（两文库/三文库）、外泌体miRNA/LncRNA-seq、WGS/WES、WGBS、RRBS、BSAS等服务