乳腺组织单细胞悬液制备

乳腺主要由腺体组成，包括乳腺小叶和导管系统。乳腺小叶是由许多小叶组成的腺体结构，每个小叶包含腺泡和导管。乳腺导管将乳汁从腺泡输送到乳头。乳腺组织结构复杂，由乳腺上皮细胞、间质细胞、基底细胞、免疫细胞等多种细胞类型和组织成分组成，这些组织协同工作实现乳腺的主要功能，包括分泌乳汁、输送乳汁和哺乳等。

乳腺癌属于女性群体的高发性癌症，制备出高质量的乳腺癌临床样本的单细胞悬液，能为乳腺相关单细胞测序及其后续发病机理、肿瘤异质性和潜在的治疗耐药机制研究提供良好的技术支撑。吉凯基因成立20多年以来积累了丰富的临床样本处理经验，一起来看下小伙伴们是如何保质保量完成乳腺相关组织的单细胞悬液制备吧！

乳腺组织单细胞悬液制备

 

1 实验目的

将人-乳腺癌组织样本分离成单细胞。

2 实验准备

酶解液：

1mg/ml 胶原酶 IV

0.5mg/ml 胶原酶I

0.04mg/ml DNase I

60U/ml  透明质酸

HBSS

【清洗液】：0.5% BSA的 PBS

3 实验步骤

（1）实验准备

样本接收，拍照留存，超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，配制含0.5%；

（2）单细胞悬液制备

1）按上述配方配制酶消化液，过滤；

2）将样本组织倒入培养皿中，放置在冰板上，记录编号，拍照留存，加入清洗液，用清洗液清洗两次；

3）弃去清洗液后，向培养皿中加入少量消化液，用剪刀将样本组织剪碎；

4）将剪碎后的组织转入到离心管中，加入适量消化液；    

5）取20ul消化悬液进行台盼蓝染色镜检；

6）用封口膜将离心管封好，将样本放置在37ºC摇床消化1h；

7）用移液器吹打消化液，辅助消化；

8）消化结束后将悬液通过100µm,40µm滤网转移至离心管内，300×g离心5min；

9）弃去上层液体，加入红细胞裂解液轻柔吹散细胞，静置3min；

10）加入清洗液至终止裂红，300×g离心5min；

11）弃去上清，加入适量清洗液重悬混匀，分别取20µl进行AO/PI计数及台盼蓝镜检；

12）根据质检结果选择合适方案，去除杂质及死细胞；

13）加入清洗液清洗，300×g离心5min；

14）弃去上清，加入适量清洗液重悬混匀，分别取20µl进行AO/PI计数及台盼蓝镜检；

15）将质检结果反馈，等待上机。

4 部分实验结果展示