骨组织是一种坚硬的结缔组织，由细胞、纤维和基质构成，纤维为骨胶纤维，基质含有大量的固体无机盐。骨的构造包括骨膜、骨质、骨髓以及血管、神经等结构。骨与骨相连形成骨骼，能够协助机体完成动作以及保护身体的重要脏器，如心、脑、肾等，而且还具有支持体重的作用，是构成人体支架的关键。

单细胞测序可以帮助我们探索一些骨科疾病的具体机制，包括骨关节炎、腰椎间盘突出症、类风湿性关节炎、半月板损伤等骨相关疾病的发病机理的分子程序、半月板退化的机制、特定细胞类群在骨骼形成中的重要作用等。骨组织中70%以上是磷酸钙、碳酸钙等无机物，消化后常有较多的杂质和碎片。但对于已有21年临床样本处理经验的吉凯来说，骨组织消化也是很OK！

 

下面就请跟小编一起，了解吉凯的专业单细胞团队是如何来针对骨组织进行特定解离和消化的吧！

 

悬液制备

小鼠骨组织单细胞悬液制备

 

1 实验目的

将小鼠骨组织样本分离成单细胞，用于单细胞测序。

 

2 实验准备

酶解液：

【消化液1】 

5mM

EDTA   

D-PBS

 

【酶液2】

2mg/mL Collagenase I

2mg/mL Collagenase II

HBSS

 

3 实验步骤

（1）实验准备

超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，配置含0.5% BSA的 PBS清洗液；

 

（2）单细胞悬液制备

1）接收样本拍照留存；

2) 配制消化液1和酶液2各2mL，使用滤器过滤；

3) 将样本倒入培养皿中，放置在冰板上，拍照留存，收集上清，加入清洗液清洗；

4) 将上清400×g, 5min离心；

5) 将组织转移到1.5mL EP管中，加入少量配置好的消化液1（EDTA），使用干净的剪刀将组织尽量完全剪碎；

6) 弃上清，将4）中细胞沉淀用消化液1重悬，加入EP管，取20uL悬液进行台盼蓝染色，发现剪碎后释放了部分细胞，也存在部分死细胞和杂质；

7) 将装有组织的EP放置在37ºC摇床上初消化30min；

8) 消化结束，吹打消化后组织及悬液，取20uL进行台盼蓝染色镜检观察；

9) 收集上层悬液至新管，加入清洗液清洗剩余组织， 300×g 离心5min；

10) 弃去上清，分别用用配制好的酶消化液2重悬沉淀和剩余的组织，放入37ºC继续消化1h；

11) 分别将两管用40uL的筛网过滤到15ml离心管中， 300 ×g离心5min，弃上清，加入1mL裂红液裂解3min；

12) 裂红结束后，加入30mL清洗液，300×g离心5min；

13) 弃上清，分别用清洗液重悬细胞，取20uL进行台盼蓝染色镜检观察及AOPI计数。

 

4 部分实验结果展示