【吉凯基因】单细胞测序前必看！淋巴结样本单细胞悬液制备「黄金 protocol」

淋巴组织是人体免疫系统的重要组成部分，主要由淋巴细胞、网状细胞和基质构成。淋巴结（lymph nodes）是一种特殊的次级淋巴器官，其大多呈肾形，全身分布于淋巴管之间，主要负责过滤淋巴液、清除病原体，并激活免疫细胞对抗感染。淋巴结的结构包括被膜、皮质和髓质，内部含有大量淋巴细胞，参与识别和攻击外来异物。淋巴液通过与淋巴结凸面相连的输入淋巴管流入，并经输出淋巴管排出^［1］。先天淋巴细胞(Innate Lymphoid Cells，ILCs)在清除细胞内外病原体、调节适应性免疫、组织修复和促进炎症等方面发挥着重要作用。在肿瘤淋巴结转移中，受影响的淋巴结数量以及它们的位置可帮助确定癌症的分期并影响治疗策略的选择。

成功对淋巴结样本进行解离及单细胞悬液制备，对于后续通过单细胞测序探索淋巴结内各种细胞类型的功能特征、它们之间的相互作用以及对不同刺激的响应机制具有重要意义。下面就请跟小编一起，看下吉凯专业团队是如何对淋巴结样本进行单细胞悬液制备的吧！

淋巴结示意图^［1］

将小鼠淋巴节组织样本分离成单细胞用于后续单细胞测序。

【酶液】：

collagenase IV

collagenase I

DNase I

FBS

bovine serum albumin (BSA)

hyaluronidase

Y-27632

HBSS

样本接收，拍照留存，超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，配制清洗液。

1) 按配方配制酶消化液，过滤；

2) 将样本组织倒入培养皿中，放置在冰板上，记录编号，拍照留存，加入清洗液，用清洗液清洗两次；

3) 弃去清洗液后，向培养皿中加入少量消化液，用剪刀将样本组织剪碎；

4) 将剪碎后的组织转入到离心管中，加入适量消化液；

5) 取20μL消化悬液进行台盼蓝染色镜检；

6) 用封口膜将离心管封好，将样本放置在37ºC摇床消化40min；

7) 用移液器吹打消化液，辅助消化；

8) 消化结束后将悬液通过100μm,40μm滤网转移至离心管内，300× g 离心5min；

9) 弃去上层液体，加入红细胞裂解液轻柔吹散细胞，静置3min；

10) 加入清洗液至终止裂红，300× g 离心5min；

11) 弃去上清，加入适量清洗液重悬混匀，分别取20μL进行AO/PI计数及台盼蓝镜检；

12) 加入清洗液清洗，300× g 离心5min,重复清洗2次去除杂质及死细胞；

13) 弃去上清，加入适量清洗液重悬混匀，分别取20μL进行AO/PI计数及台盼蓝镜检；

14)  将质检结果反馈，等待上机。

人 淋巴结穿刺样本

细胞活率：97.23%

活细胞浓度：1.22E+06/mL

小鼠 淋巴结样本

细胞活率：99.15%

活细胞浓度：7.1E+05/mL

【参考文献】

1.Jaeseong Lee., et al,.2023. Nanoparticles for Lymph Node-Directed Delivery. Pharmaceutics.