CAR-M：肿瘤治疗的『吞噬型武器』

吉凯慢病毒高效转染巨噬细胞系、Ad5F35嵌合型腺病毒高效感染人PBMC诱导原代巨噬细胞。

在载体的构建上：CAR构建体包括CD8α信号肽，c-MET scFv序列，CD8α铰链区，FcRγ信号激活结构域和CD19 PI3K募集结构域，通过T2A序列与EGFP序列同时连接。并使用永生化的人单核细胞系THP-1建立稳定传代的CAR-M-c-MET THP1细胞。

研究团队成功构建了CAR-M-c-MET THP-1 细胞，把促炎极化的CAR-M-c-MET 细胞以及对照的 THP-1细胞，和带有 mCherry标记的 BxPC - 3 胰腺癌细胞按照不同的效应/靶细胞（E:T）比例共培养，发现CAR-M-c-MET 细胞的吞噬结合效率相比对照细胞要高得多。

由于巨噬细胞对病原体具有自然吞噬的特性，这使得人原代巨噬细胞不易被基因操作中常用的病毒载体转染。研究人员采用Ad5F35嵌合型腺病毒载体将上述CAR序列转染人PBMC通过细胞因子诱导在体外衍生原代巨噬细胞，从而产生人单核细胞衍生的CAR-M。克服巨噬细胞转染的挑战，在3000的MOI下实现了高转染效率。

该 CAR 构建体具有 CD8a 铰链和跨膜结构域以及串联信号结构域，该结构域包括 Fc 受体的共同γ链和 c-Met 募集结构域。CAR 的表达由与 eGFP 报告基因相连的 SFFV 启动子驱动，缺乏细胞内信号结构域的抗 c-Met CAR （∆CAR） 的截短形式作为对照。

为了评估CAR介导的c-Met+肿瘤细胞靶向的抗癌疗效，将CAR巨噬细胞和对照细胞（eGFP-M，∆CAR-M）与c-Met+mCherry标记的Raji细胞以1：1的比例共培养。结果表明与eGFP-M和∆CAR-M组相比，CAR-M组表现出显着更高的吞噬水平。

CAR-M技术是指用特异性CAR修饰巨噬细胞，不但能够靶向吞噬肿瘤细胞，还能够通过分泌促炎症细胞因子改变肿瘤附近的微环境，同时将肿瘤抗原提呈给T细胞，激活T细胞对肿瘤的免疫反应； CAR-M细胞高效浸润肿瘤，非肿瘤靶向毒性较小。

CAR是一种人工设计的跨膜受体，通常包括一个识别肿瘤抗原的单链可变区（scFv）、一个铰链区、一个跨膜区和一个胞内信号传导区。通过基因工程手段将CAR导入巨噬细胞，使其能够特异性识别并杀伤表达相应抗原的癌细胞^[3]。

CAR-M疗法相比较CAR-T疗法，不但能够靶向吞噬肿瘤细胞，还能够通过分泌促炎症细胞因子改变肿瘤附近的微环境，同时将肿瘤抗原提呈给T细胞，激活T细胞对肿瘤的免疫反应； CAR-M细胞高效浸润肿瘤，非肿瘤靶向毒性较小。但要达到预期的效果还需要克服许多问题。随着技术的发展，相信这些在不久的将来能够取得更好的突破。

【参考文献】

[1].Zheng H,et al. Chimeric antigen receptor macrophages targeting c-MET(CAR-M-c-MET) inhibit pancreatic cancer progression and improve cytotoxic chemotherapeutic efficacy. Mol Cancer. 2024 Dec 6;23(1):270. 

[2]. Hu L,et al. Leveraging CAR macrophages targeting c-Met for precision immunotherapy in pancreatic cancer: insights from single-cell multi-omics. Mol Med. 2024 Nov 26;30(1):231.

[3]. Li N, et al. A new era of cancer immunotherapy: combining revolutionary technologies for enhanced CAR-M therapy. Mol Cancer. 2024 Jun 1;23(1):117. 

[4]. Lei A,et al A second-generation M1-polarized CAR macrophage with antitumor efficacy. Nat Immunol. 2024 Jan;25(1):102-116.

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