想要感染效率高，吉凯教你小妙招

 想要感染效率高=病毒越多越好？ 相信很多同学在做病毒感染操作时，为了提高感染效率，往往会选择多加入一些病毒。可很多时候病毒加多了，细胞状态却变差了。这是什么原因造成的呢？更多的时候，病毒加了不少却还是达不到想要的效果，有更好方法可以增加感染效率吗？

今天来给大家来做一次小科普。不想花时间看原理，只想知道怎么做的小伙伴，直达文末↓↓↓

首先来看看，慢病毒产生细胞毒性的原因。了解了原因，我们才好针对性的找对策嘛。

1. 杂质

病毒溶液中含有的杂质蛋白、内毒素等对细胞造成的毒性（想了解的，请看上一期：加了病毒后，细胞半死不活？可能是你的病毒不够“纯”）。特别对于某些外源刺激敏感的细胞来说，严重时将导致细胞死亡。这是病毒感染细胞后，状态差异的主要原因。

 

低纯度慢病毒（1，2，3，4）与高纯度慢病毒（5，6）SDS-PAGE电泳对比图。红色框线处（约72kDa）为病毒外壳蛋白，其余为杂质蛋白

 

2. 过度感染

外源基因的过度表达，会导致目的细胞本身正常新陈代谢失衡。这是有些细胞过感会死亡的主要原因。
 

所以说，为了提高感染效率，可以适当增加MOI，但加入的病毒绝不是越多越好。对于敏感细胞来说，用高滴度高纯度的慢病毒，可以减少病毒中的杂质对细胞状态的影响。同时，不建议追求太高的感染效率，能够达到～80%的感染效率即可满足大部分实验需要。

 

我们再来看第二种情况：病毒加了不少，还是达不到想要的效果，可以使用什么方法增加感染效率？

那就得从影响慢病毒感染效率的因素说起了：

1. 细胞膜的流动性

2. 细胞膜表面受体的表达丰度

3. 病毒与细胞的接触面积和接触几率

4. 细胞膜与病毒外壳蛋白电荷的多少

专业的事情交给吉凯基因，我们从大量的文献及实际操作中总结了增加感染效率的方法，大家可以根据自己的实验条件，选择性的使用：

1. 调整细胞状态，感染时使用对数期的细胞：增加细胞膜的流动性

2. 降低感染时血清浓度，使用无血清/低血清的培养基：降低血清蛋白对病毒外壳蛋白的封闭

3. 离心法，感染时将细胞培养板密封，用平角转子离心机1000g离心1h，再放回培养箱中正常培养：增加慢病毒与细胞的接触几率，但对细胞有一定的机械损伤，仪器要求高

4. 感染时加入Rentronectin等纤粘蛋白：增加慢病毒与细胞接触几率，但会影响细胞的贴壁状态

5. 使用传统的感染试剂，如Polybrene：中和细胞膜和病毒粒子之间的电荷排斥，但Polybrene本身就具有细胞毒性，部分细胞对Polybrene敏感，容易导致细胞状态变差、形态发生变化、甚至死亡

6. 使用新一代感染试剂Hitrans G：相比Polybrene，可显著提高细胞感染效率，且对细胞毒性极低，更适合敏感细胞使用

 

小结：

1.用高滴度高纯度的慢病毒，可以减少病毒中的杂质对细胞状态的影响。

2.使用对细胞毒性低的感染试剂，如Hitrans G，可在显著提高感染效率同时保证细胞状态。

3.避免过度感染，一般来说，80%的感染效率即可满足实验需要。


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